固定是组织处理最重要的一步，也是在整个制片过程中最无法补救的一步。所谓“固定”，就是组织离体后，用各种办法使其细胞内的物质尽可能接近其生活状态时的形态结构和位置的过程。固定的目的是为了防止组织、细胞自溶与腐败，防止细胞内酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质抗原、脂肪、碳水化合物或酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构与生活时相仿，还要最大程度地保存抗原、DNA等物质。另外，组织固定后，具有硬化作用，增加了组织的韧性，有利于取材和组织脱水。如果标本没有及时固定或固定不恰当，组织已经自溶或腐败，将无法逆转。

固定的注意事项：

（1）固定必须及时：组织离体后，必须在1小时内放入4%中性缓冲甲醛液内固定，有特殊要求的组织如胃癌检测Her2应在30分钟内放入4%中性缓冲甲醛液内固定。

（2）固定液的选择：4%中性缓冲甲醛液。

（3）固定液的pH：7.0。

（4）固定液的量：必须大于组织体积的4-10倍。

（5）固定液的浓度：浓度必须准确，过稀或过浓都会影响组织的形态和固定的效果。

（6）固定液的质量：发现固定液变质，如甲醛液体产生白色沉淀，应立即更换。

（7）固定的时间：新鲜标本，应该剖开固定12-24小时后再取材。大标本取材后在室温下还需再固定4-6小时，小标本取材后应该在室温下再固定3-4小时，如果是新鲜小标本取材，必须再固定4-8小时。如果室内温度低，固定时间还需延长。

（8）固定的温度：最好固定于室温，如时间不够，可放于35-45℃的全封闭组织处理机内，温度过高，会加快组织的自溶和组织的过度收缩，加温可破坏细胞内的抗原。

（9）固定液的渗透速度：4%中性缓冲甲醛液3-5mm/24小时。

（10）需要做免疫组化或分子病理的标本，从标本离体至组织脱水开始，总固定时间一般不要超过48小时，同时也不要少于24小时（厚度2-3mm）。

 在中国，组织固定是病理切片质量存在问题的最主要原因：

1、固定不及时，手术医生将标本离体后不及时固定。

2、没有剖开固定。

3、固定液量不足（包括固定容器太小）。

4、没有用规范的固定液。

5、固定时间不够，有的病理科为了使病理报告尽快出来而缩短了固定时间。  

没有充分的固定，就不可能取好材，不可能有优质的HE切片，也不可能有好的免疫组化和分子病理结果，因此，唯一能解决这个问题只有靠病理科自己，建议各医院病理科应该有专业标本处置人员：将手术室的标本新鲜切下后在半小时内直接送至病理科，由病理科专业人员剖开、加入足量的固定液。只有这样，才能真正将组织固定工作做好。